genebridges K006說明書

Quick & Easy E.coli Gene Deletion Kit

快速簡便的大腸桿菌基因刪除試劑盒

用于快速敲除或修飾大腸桿菌染色體上的基因。

特征

• Red / ET的忠實重組
• 快速準確
• 可能有多個淘汰賽
• 方便地去除重組質粒

應用領域

• 該試劑盒旨在在不到一周的時間內敲除或改變大腸桿菌染色體上的基因

大腸桿菌染色體上基因的靶向破壞

1.轉化用表達質粒pRedET轉化將被修飾
的大腸桿菌菌株。

2. Red / ET重組
Red / ET表達是通過添加L-阿拉伯糖和溫度變化來誘導的。含有50 bp同源臂的FRT-PGK-gb2-neo-FRT盒被轉化。Red / ET介導的重組通過插入盒帶破壞了靶基因座。

3.可選：去除選擇標記
Flp介導的切除，僅留下一個FRT部位。（另請參見我們的FRT選擇盒和Flp表達質粒和菌株）。

描述

Red / ET重組使堿基對可以準確，特異性和忠實的方式交換遺傳信息。試劑盒隨附有FRT側翼的卡那霉素抗性標記盒，可用于替換大腸桿菌染色體上的基因。Red / ET重組可替代大腸桿菌染色體上長達30kb的片段。如果需要，使用FRT側翼抗性盒替代靶基因可以隨后通過FLP重組酶步驟去除選擇標記。FLP表達質粒可以從Gene Bridges購買。通過重復插入試劑盒附帶的功能盒或與Gene Bridges提供的其他功能盒組合，可以產生多個基因敲除。重組過程由于pRedET表達質粒的優化設計而受到嚴格控制。重組蛋白的基因在誘導型啟動子的控制下，質粒帶有溫度敏感的復制起點，可在重組后方便地去除質粒。

內容

• 兩個Red / ET重組蛋白表達質粒pRedET（tet）和pRedET（amp）。通過用這些質粒轉化，可以使任何大腸桿菌菌株變成Red / ET熟練的。
• FRT位于卡那霉素抗性模板的側面（FRT-PGK-gb2-neo-FRT），可用于您自己的實驗。
• 替代大腸桿菌染色體上甘露糖轉運蛋白（manX）基因的陽性對照。
• 詳細的協議，質粒，圖譜和序列的描述。

順序

FRT-PGK-gb2-neo-FRT

AATTAACCCTCACTAAAGGGCGGCCGC GAAGTTCCTATTCTCTAGAAAGTATAGG AACTTC ATT CTACCGGGTAGGGGAGGCGCTTTTCCCAAGGCAGTCTGGAGCATGC GCTTTAGCAGCCCCGCTGGGCACTTGGCGCTACACAAGTGGCCTCTGGCCTCGCA CACATTCCACATCCACCGGTAGGCGCCAACCGGCTCCGTTCTTTGGTGGCCCCTT CGCGCCACCTTCCACTCCTCCCCTAGTCAGGAAGTTCCCCCCCGCCCCGCAGCTC GCGTCGTGCAGGACGTGACAAATGGAAGTAGCACGTCTCACTAGTCTCGTGCAGA TGGACAGCACCGCTGAGCAATGGAAGCGGGTAGGCCTTTGGGGCAGCGGCCAATA GCAGCTTTGCTCCTTCGCTTTCTGGGCTCAGAGGCTGGGAAGGGGTGGGTCCGGG GGCGGGCTCAGGGGCGGGCTCAGGGGCGGGGCGGGCGCCCGAAGGTCCTCCGGAG GCCCGGCATTCTGCACGCTTCAAAAGCGCACGTCTGCCGCGCTGTTCTCCTCTTC CTCATCTCCGGGCCTTTCGACCTGCAGCAGCACGTGTTGACAATTAATCATCGGC ATAGTATATCGGCATAGTATAATACGACAAGGTGAGGAACTAAACCATGGGATCG GCCATTGAACAAGATGGATTGCACGCAGGTTCTCCGGCCGCTTGGGTGGAGAGGC TATTCGGCTATGACTGGGCACAACAGACGATCGGCTGCTCTGATGCCGCCGTGTT CCGGCTGTCAGCGCAGGGGCGCCCGGTTCTTTTTGTCAAGACCGACCTGTCCGGT GCCCTGAATGAACTGCAGGACGAGGCAGCGCGGCTATCGTGGCTGGCCACGACGG GCGTTCCTTGCGCAGCTGTGCTCGACGTTGTCACTGAAGCGGGAAGGGACTGGCT GCTATTGGGCGAAGTGCCGGGGCAGGATCTCCTGTCATCTCACCTTGCTCCTGCC GAGAAAGTATCCATCATGGCTGATGCAATGCGGCGGCTGCATACGCTTGATCCGG CTACCTGCCCATTCGACCACCAAGCGAAACATCGCATCGAGCGAGCACGTACTCG GATGGAAGCCGGTCTTGTCGATCAGGATGATCTGGACGAAGAGCATCAGGGGCTC GCGCCAGCCGAACTGTTCGCCAGGCTCAAGGCGCGCATGCCCGACGGCGAGGATC TCGTCGTGACCCATGGCGATGCCTGCTTGCCGAATATCATGGTGGAAAATGGCCG CTTTTCTGGATTCATCGACTGTGGCCGGCTGGGTGTGGCGGACCGCTATCAGGAC ATAGCGTTGGCTACCCGTGATATTGCTGAAGAGCTTGGCGGCGAATGGGCTGACC GCTTCCTCGTGCTTTACGGTATCGCCGCTCCCGATTCGCAGCGCATCGCCTTCTA TCGCCTTCTTGACGAGTTCTTCTGAGCGGGACTCTGGGGTTCGAATAAAGACCGA CCAAGCGACGTCTGA GAGCTCCCTGGCGAATTCGGTACCAATAAAAGAGCTTTAT TTTCATGATCTGTGTGTTGGTTTTTGTGTGCGGCGCG GAAGTTCCTATTCTCTAG AAAGTATAGGAACTTC CTCGAGCCCTATAGTGAGTCGTATTA