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抗體亞單位切割酶

在體內(nèi)外細(xì)胞或組織實(shí)驗(yàn)中，全抗體中由于Fc保守片段的存在可能導(dǎo)致許多意想不到的結(jié)果，因此單一的特異性片段F(ab’)2或 Fab 將可能獲得*實(shí)驗(yàn)結(jié)果。常規(guī)獲取單一F(ab’)2 或 Fab片段的方法為木瓜蛋白酶或胃蛋白酶，但是這些方法需要嚴(yán)苛的降解條件或催化劑的存在，因此不僅耗時(shí)，而且產(chǎn)量降低，產(chǎn)物活性被部分破壞。

FabRICATOR ^®是目前*一種能在Ig G內(nèi)特定的單一位點(diǎn)進(jìn)行切割的蛋白酶，切割后產(chǎn)生F(ab’)2 及 Fc片段。FabRICATOR ^®是由人化膿性鏈球菌的IdeS酶重組改進(jìn)而來，IdeS酶對(duì)Ig G有特異性，目前還未發(fā)現(xiàn)該酶有其他底物存在。改進(jìn)后的FabRICATOR ^®屬于半胱氨酸蛋白酶，能快速準(zhǔn)確切割Ig G生成F(ab’)2 及 Fc片段。這種切割反應(yīng)可在生理?xiàng)l件下進(jìn)行（在目前通用的緩沖體系pH 從6.0 到8.0均可勝任），因此zui大程度上保持了抗體活性。 目前所有人類的IgG均被證實(shí)可被FabRICATOR®特異性切割，另外兔、綿羊及猴子的IgG也適用但是小鼠只有IgG3可被切割，而小鼠IgG2則需要提高FabRICATOR®濃度及延長(zhǎng)切割時(shí)間

FabRICATOR ^®相比傳統(tǒng)抗體亞單位制備法的優(yōu)勢(shì)：

• 快速切割省時(shí)省力30 minutes
• 無需嚴(yán)苛的反應(yīng)條件
• 產(chǎn)物單一明確（Fc 及(Fab')2片段）
• 生理?xiàng)l件下反應(yīng)確保產(chǎn)物活性

FabRICATOR ®相關(guān)產(chǎn)品

• FabRICATOR (IdeS)：

快速在IgG 特意位點(diǎn)切割，得到 Fc 及(Fab')2片段。

二、FabULOUS (SpeB)

作為FabRICATOR家族的補(bǔ)充，FabULOUS可以在抗體較高位點(diǎn)進(jìn)行切割，便于進(jìn)一步分析抗體結(jié)構(gòu)。

三、IgGZERO (Endo S) 與GlycINATOR (EndoS2)

特異性水解去除抗體Fc片段上的N型糖鏈，增強(qiáng)抗體特異性與敏感性。

四、FragIT 試劑盒

    該試劑盒含有將FabRICATOR融合與瓊脂糖微珠上，配備純化柱便于快速地從0.5 mg to 100 mg抗體中制備與純化 Fc 及(Fab')2。(Fab')2可流經(jīng)純化柱獲得，而被柱子吸附的Fc也可zui后從柱子中洗脫得到，從而得到分離的 Fc 及(Fab')2片段。(Fab')2片段還可通過添加2-MEA (2巰基乙醇) 進(jìn)一步解離為Fab片段。

 五、Anti-FabRICATOR抗體

來源于山羊的用于檢測(cè)FabRICATOR 酶的Anti-FabRICATOR多克隆抗體，可用于FabRICATOR酶的Western blot與 ELISA 檢測(cè)。

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相關(guān)參考文獻(xiàn)：

Deglycosylation of mAb by EndoS for Improived Molecular Imaging：Peng Gao, Kenneth L. Pinkston, Nathaniel Wilganowski, Holly Robinson, Ali Azhdarinia, Banghe Zhu, Eva M. Sevick-Muraca, Barrett R. Harvey

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